Molekularna dijagnostika: real-time PCR

Trenutno, molekularni mehanizam koji dijagnostika lančana reakcija polimeraze (PCR), koji je poticaj za razvoj velikog broja metoda dijagnoze bolesti, na temelju određivanja genetskog materijala. Za izvođenje PCR u realnom vremenu pomoću fragmenta (posebno nukleinske kiseline) uzročnika, koji se ne može naći kod drugih.

Načelo PCR je množenje određene patogen DNA fragmenata milijuna puta s DNA polimerazom u posebnoj jedinici tekstu termalni ciklički uređaj, koji daje ciklički ponavljanje temperaturnog režima za određeni program.

Dijagnostika PCR omogućuje ponoviti niz umnožavanja, održavanja aktivnost enzima. Kada je pojačanje odvija glatko, u jednom ciklusu broj primjeraka određeni dio DNK patogena parovima, nakon trideset ciklusa - sto i deset godina. Zato PCR koristi u dijagnozi odrediti dovoljno male patogena, od kojih je identifikacija je nemoguća bez njega.

Treba napomenuti da je RNA ne može biti predložak za PCR u realnom vremenu. Stoga, kako bi se otkrila virusnu RNK prije amplifikacije da se DNA povezana s odgovarajućom fragment od toga. Lančane reakcije polimeraze omogućuje proizvodnju DNA i RNA mjerenja patogen. Tako dobiveni podaci koriste za praćenje učinkovitosti terapije koristi, a ocjenu o kliničkom prognozom.

Osim toga, u stvarnom vremenu PCR ne zahtijeva dodatne mjere u odnosu na dešifriranje ciljne DNA ili amplikonima, koji služe kao prepreka pravilnom dijagnozom i dovesti do pogrešnih rezultata. Ovaj pristup omogućuje da ne koriste korak elektroforezu, što dovodi do smanjenja rizika produkata reakcije lanca polimeraze. Isto tako, s obzirom na smanjenje broja manipulacija sa sredstvom, smanjuju vrijeme istraživanja, pojednostavljuje proces, smanjuje vjerojatnost pogreške. PCR je također vam omogućuje da odredite početni broj kopija DNK patogena u kliničkom ispitivanju kako bi se identificirali razdoblja pogoršanja bolesti i poduzeti pravodobne mjere za liječenje pacijenta.

Danas postoji veliki broj metoda pojačanje fiksacije u realnom vremenu. Najčešće korišteni razne tehnike prijavljuje produkt amplifikacije korelaciji s fluorogenske sondi, od kojih je intenzitet zračenja se mijenja ovisno o akumulaciji produkta amplifikacije i snimljenih u stvarnom vremenu pomoću posebnog uređaja naziva thermocycler s optičkim modulom. On pruža visoku razinu osjetljivosti analize. U isto PCR produkta može biti otkrivena, zajedno s velikom količinom nusproizvoda, u vrijeme kada se koristi elektroforeza ga u nekim slučajevima nije primijetio.

Pomoću PCR, pozitivnih i negativnih kontrolnih uzoraka u realnom vremenu. Tako, pozitivnih i negativnih uzoraka u studiji analizirali kao različita uzorka, od kontrolnog uzorka naznačen time da se uvede u svaki takav uzorak i prolazi sve korake analize.

Danas postoji veliki broj uređaja za obavljanje lančane reakcije polimeraze. To uključuje Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid i Roche. Svaki od njih ima svoje prednosti i mane

Treba napomenuti da je PCR - metoda dijagnoze koristi u velikim znanstveno istraživačke i dijagnostičke centre diljem svijeta jer daje priliku za obavljanje neposredne tumačenje rezultata.